在活體RNAi關鍵點：類似藥物屬性的引入，如穩定性、細胞內的傳送、組織的生物可溶性進入合成的siRNA. 授予siRNA類似藥物的屬性 化學穩定性的膽固醇共聚的siRNA 顯著的改善了其在體內和體外的藥物屬性。 化學穩定性增強的方法：對正義和反義鏈進行部分的phosporothioate backbone和 2’－O－methyl sugar 修飾，增加其在血清中和組織勻漿中對核酸內切酶和外切酶的抗性。 在反義鏈的3’ 端引入兩個2’－O－methyl核苷酸。 增強其藥物屬性的方法：在正義鏈3’ 端通過一個pyrrolidine linker與膽固醇相連接，由于在3’ 端的連接并不改變其siRNA的活性，而且使其能夠與HAS特異性的結合（human serum albumin）并且增強了其在血清中的穩定性。 核酸的生物分布：通過對siRNA的RPA分析來確定。 siRNA進入體內的方式：通過尾靜脈注射 生物效應的確定： 1.??確定基因是否表達？在何種組織中特異性表達？ 2.??試用RT-PCR和Western blot或者免疫組化來確定 siRNA干擾基因表達應該考慮的一些效應： 1.是否是特異性的，而非off－target效應、干擾素效應造成的。 2.siRNA特異性可以用不同的siRNA針對基因不同區域 3.設置陽性對照組，可以設置多個陽性對照組，并且通過GAPDH進行normalization處理 4.設置mismatch對照組 確認siRNA在體內的作用機制 通過5’ RACE來確認特異的mRNA斷裂產物，已經在植物和小鼠胚胎中采用方法確定了miRNA指導的mRNA的斷裂，此種方法是用來確認是RNAi機制的作用引起目的基因的抑制。 總的來看siRNA干擾都有相應的劑量效應。