多克隆抗體的制備，純化及免疫電泳

【實驗目的】 ⒈ 加深對抗體基本知識的了解。 ⒉ 了解多克隆抗體的制備及純化的基本方法。 ⒊ 了解免疫電泳的基本過程和實驗依據。 一、多克隆抗體的制備 【實驗原理】 當將抗原注射入實驗動物體內時，一系列抗體生成細胞會不同程度的與抗原結合，受抗原刺激后在血液中產生不同類型的抗體，這種由一種抗原刺激產生的抗體稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分—抗原決定簇相結合。 將抗原導入敏感動物體內后，可刺激網狀內皮細胞系統，尤其是淋巴結和脾臟中的淋巴細胞大量增殖。如圖所示，實驗動物對初次免疫和二次免疫的應答有明顯的不同。通常初次免疫應答往往比較弱，尤其是針對于易代謝，可溶性的抗原。首次注射后大約7天，在血清中可以觀察到抗體但抗體的濃度維持在一個較低的水平，在大約10天左右抗體的滴度會達到最大值。但同種抗原注射而產生的二次免疫應答的結果明顯不同，和初次免疫應答相比抗體的合成速度明顯增加并且保留時間也長。 免疫應答的動力學結果取決于抗原和免疫動物的種類，但初次和二次免疫應答之間的關系是免疫應答的一個重要特點。三次或以后的抗原注射所產生的應答和二次應答結果相似：抗體的滴度明顯增加并且血清中抗體的種類和性質發生了改變，這種改變被稱為免疫應答的成熟，具有重要的實際意義。通常在抗原注射4-6周后會產生具有高親和力的抗體。 【實驗材料】 ⒈ 實驗動物 成年兔。 ⒉ 實驗器材 特制兔盒；刀片；25G針頭；1ml注射器；20 ml 血液收集管；藥鏟；離心機以及塑料離心管；加樣器及加樣管；燒杯。 ⒊ 實驗試劑 ⑴ 抗原；乙醇；20mM 磷酸緩沖溶液pH7.2。 ⑵ 福氏完全佐劑和福氏不完全佐劑： 福氏完全佐劑和福氏不完全佐劑的成分 （福氏完全佐劑的制備：使用前在福氏不完全佐劑中加入適量殺死的分枝桿菌）