蛋白酶K(Proteinase K)使用小貼士

蛋白酶K在BSE的檢測中用來消化PrPc,用來區別致病的PrPsc,它的正確使用對檢測特異性和敏感性都有重要影響，希望大家多多交流在使用中的心得，我就拋磚引玉，先總體說一個： 概述: 蛋白酶K是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶, 具有很高的比活性。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶K失活, 該酶在較廣的pH范圍內(pH 4-12.5)均有活性

來源: 源于白色念球菌(Tritirachium album)

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反應條件: 蛋白酶K在較廣的緩沖液pH范圍(pH 4-12.5), 溫度范圍(37-60℃), 鹽濃度(如: 3 M GuHCl)或尿素(4 M)條件下均有活性。在一些去污劑如: Tween20(5%), Triton X-100 (1%)和SDS(1%)條件下也有活性

比活性: 30 units/mg

分子量: 28.9 kDa

單位定義: 在250 μl反應體系, 37℃條件下1分鐘內能分解釋放相當于1 μmol酪氨酸的folin-陽性氨基酸和肽所需要的蛋白酶K的量定義為一個單位(1)

貯存條件: 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1 mM CaCl2和50%甘油。貯存于-20℃ ?

Proteinase K，中文名為蛋白酶K。不含DNase，不含RNase，進口分裝，可直接使用。可以用于消化各種蛋白。用于各種常見的 ? 分子生物學、細胞生物學等相關實驗，例如基因組DNA抽提、酶的消化去除等。 ? 酶活力，>30U/mg。在37℃，以血紅蛋白為底物，1分鐘內可以產生相當于1微摩爾酪氨酸Folin陽性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的 ? 量，定義為一個單位蛋白酶K酶活力。 ? 在很寬的pH范圍內有效，有效的pH范圍為pH4.0-12.5，最佳pH范圍為pH7.5-8.0。 ? 蛋白酶K的最佳反應溫度為65℃，但在65℃或更高的溫度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多時候反應溫度選擇50-55℃。 ? 在0.2-1%SDS或約10mM尿素存在的情況下，蛋白酶K顯示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作濃度為0.05-1mg/ml，根據所用緩沖 ? 液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。 ? 常用濃度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、鹽酸胍對蛋白酶K的活力影響不大。

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