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  • 實驗方法> 生物化學技術> 化學生物學實驗技術>大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ

    大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ

    關鍵詞: 大腸桿菌 dna 聚合酶來源: 互聯網

    大腸桿菌DNA聚合酶(E.Coli DNA polymerase)主要有3種作用:①5’→3’的聚合作用。但不是復制染色體而是修補DNA,填補DNA上的空隙或是切除RNA引物后留下的空隙。②3’→5’的外切酶活性。消除在聚合作用中摻入的錯誤核苷酸。③5’→3’外切酶活性。切除受損傷的DNA。它在切口平移(nick translation)中應用。

      大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一個片段,只有在5’→3聚合酶活性和3’→5’外切酶活性,失去了5’→3外切酶活性。它可用于填補DNA單鏈末端成為雙鏈。如果供給32P標記的三磷酸核苷酸,則可使DNA帶上同位素標記。當用交錯切割的限制酶切成帶有單鏈粘性末端的DNA片段,要用被切成平頭末端的DNA片段連接時,可以先用Klenow片段使粘性末端的單鏈補齊成為平頭,然后在DNA連接酶作用下把兩個DNA片段連接起來。

      另外還有大腸桿菌DNA聚合酶Ⅱ和大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ。前者不能利用單鏈DNA或poly(dA-dT)為模板。需有鎂離子和dNTP時才能表現出酶活性,無自發合成DNA的作用。后者沒有5’→3外切酶活性,也不能用單鏈DNA作為模板。

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