問：我在做病毒純化時，需先用超速離心，再用蔗糖密度梯度離心，求助高手用蔗糖密度梯度離心時的轉速與超速離心時的轉速有聯系嗎，是相等還是蔗糖密度梯度離心的轉速要比超速離心的速度高？若為后者，那又若何決定蔗糖密度梯度離心時的轉速？謝謝！

答：1、病毒的純化時，先用超速離心，你應該查一下資料，看在多大的轉速時能夠把病毒離心下來．那么你的這一步的轉速應該至少不小于該轉速，你這一步離心下來的沉淀中含有病毒和蛋白成分。

2、因此你的第二步工作就是要將病毒與其他的蛋白以及雜質分離開，密度梯度離心就可以達到該目的。這時你的離心速度要考慮病毒的大小和蔗糖的密度，使得病毒不能沉淀道管底又可與蛋白層分開。這也可能要具體問題具體分析。

問：謝謝主任的指點，我的病毒直徑為100nm。查閱了有觀資料，超速離心為21000rpm,45min，我用24000rpm2hr，我用20%-60%連續蔗糖密度梯度離心，該病毒在蔗糖中的浮密度為1.18mg/ml，請問我的糖密度梯度離心速度大概是多少？謝謝！

答：我們實驗室IBV （80-100nm）的純化是：l 病毒純化濃縮（方法一）1、冷凍之尿囊液解凍后，4℃，11000rpm離心20min。2、取上清，加入30%PEG6000（含7.85%NaCl）至沉淀出現（終濃度約為7~8%），4℃放置（或攪拌）過夜。3、4℃，19000rpm離心20min，棄上清，沉淀用適量TEN溶解。4、4℃，35000rpm離心3hrs，棄上清，沉淀用適量TEN溶解。5、4℃，33000rpm蔗糖密度梯度離心2.5hrs（蔗糖梯度：20%, 30%, 40%, 50%, 60%）。6、抽取40%蔗糖帶（含IBV病毒），-40℃保存。

你的我想也差不多吧！

答：你的病毒在蔗糖中的浮密度為1.18mg/ml，如果經過足夠長的時間的離心話，那么大概就沉淀在40%-50%靠近40%的這已層中。（40%的蔗糖25度時的濃度為1.176，50%的蔗糖25度時的濃度為1.230）現在必須知道病毒的沉降系數才能算出她你所需要的時間。單純回答你的離心速度時豪無意義的，必須與時間結合來說明你的離心。一定的速度加上一定的時間才能把病毒分開。