維生素A的測定:比色法

實驗原理

維生素A（視黃醇）屬于脂溶性維生素，在氯仿溶液中能與三氯化銻生成不穩定的藍色物質，此反應稱為Carr-price反應，可用于維生素A 的定性鑒定和定量測定，所生成的顏色的深淺與溶液中維生素A的量成正比。在一定時間內可用分光光度計 在620nm波長下測定其吸光度。

試劑和器材

一、試劑

無水硫酸鈉；醋酸酐；無水氯仿；乙醚。

25％三氯化銻－氯仿溶液：稱取干燥的三氯化銻25g溶于100mL無數氯仿中，棕色瓶避光儲存。

維生素A標準液：準確稱取標準維生素A，置于容量瓶中，用氯仿溶解，配成100IU/mL 的標準液。

二、材料

魚肝油。

三、器材

試管1.5×15cm（×10）;移液管10mL（×1）, 1 mL（×11）；容量瓶25mL（×10），帶塞錐形瓶250mL（×1），研缽，分光光度計。

操作方法

一、制作標準曲線

將維生素A標準液用氯仿稀釋成不同濃度的標準系列（如10，20，30，40，50，60，70，80，90，100IU/mL）。再取相同數量比色杯，順次加入1mL氯仿和1mL標準液，各管加入醋酸酐一滴，制成標準比色列。

用氯仿于620nm波長處調零。將標準比色列按順序移至光路前，迅速加入9mL三氯化銻－氯仿溶液，在6秒內測光吸收度。以吸光度為縱坐標，以維生素含量為橫坐標，繪制標準曲線圖。

二、樣品測定

采用研磨法測維生素A的含量。

研磨：精確稱取2－5g樣品，置于研缽內，加入3－5倍樣品重量的無水硫酸鈉，仔細研磨至樣品中的水分完全被吸收。

提取：小心將上述研磨物移入帶塞的錐形瓶中，準確加入50－100mL乙醚，蓋好塞子，用力振搖2分鐘，使樣品種維生素A 溶入乙醚中，將錐形瓶置于冰水中1－2h, 直至乙醚液澄清為止。

濃縮：取澄清乙醚提取液2－5mL, 放入比色管中，在70－80℃水浴中抽氣蒸干，立即加入氯仿1mL 溶解殘渣，再加1滴醋酸酐和9mL 三氯化銻，混勻，在6秒內測其吸光值。

據所測吸光值從標準曲線上查處待測管中維生素A的國際單位數，再根據稀釋關系求出樣品中維生素A的含量。

注意事項

(1) 維生素A極易被光線破壞，實驗操作應在微弱光線下進行。

定量測定維生素A所用的試劑和器材必須絕對干燥。微量水分可使三氯化銻，不再與維生素A反應，并出現混濁。在試管中加入1－2滴醋酸酐可除去微量吸入的水分。

(2) 氯仿應不含分解物，否則會破壞維生素A。