華勃氏呼吸儀的使用（酵母細胞好氧量的測定)

相關專題 ?

一、原理：酵母細胞的呼吸作用要消耗氧氣，可用華勃氏呼吸儀測定其好氧量。由于在好氧的同時放出二氧化碳，需用氫氧化鉀加以吸收。

二、材料與試劑

酵母懸浮液：每毫升含1×108-10×108個細胞、3%葡萄糖溶液、0.02M磷酸二氫鉀溶液、20%氫氧化鉀、華勃氏呼吸儀

三、操作方法

1、取已知體積(預先經水銀重量法測定)的反應瓶。在反應瓶中心的小杯加20%氫氧化鉀溶液0.2ml，在反應瓶中加入0.02M磷酸二氫鉀1ml，3%葡萄糖液1ml和酵母細胞懸浮液1ml。同時取一反應瓶作為溫度計，瓶中加入3.2ml蒸餾水。并檢查系統保證不漏氣。

2、把反應瓶裝置好，于28℃溫度振蕩15min，以達溫度平衡(平衡過程，開三通活塞，與大氣相通)。

3、關閉活塞，將檢壓計密閉端的液柱調節到參比點，記錄開口端液柱高度。繼續振蕩，每隔10min讀數一次，記錄60min內液柱高度的變化。

四、計算

根據反應瓶總體積V，反應瓶內液體體積Vf(3.2ml),反應溫度t(28℃)，28℃時氧氣的溶解度ao2(0.027mlO2/ml),P0(10000mm),計算反應瓶常數：

K=

再根據液柱高度變化，計算60min氧氣消耗的體積，再根據酵母細胞懸浮液的濃度(細胞數/毫升數)計算出每個細胞每小時的平均好氧量。