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介 紹 抗體和抗體產品在很多商業化產品中扮演了重要角色，如生物醫藥、診斷試劑盒以及色譜介質等。這些產品的質量控制對生物醫藥企業以及診斷試劑公司來說是至關重要的。通常用于檢測抗體產品質量的方法有電泳和色譜法，它們能提供結構信息但不能提供結合活性的信息。例如無法給出不同批次間抗體產品活力的差別。等溫滴定微量熱技術(ITC)提供了一種非常簡單而且準確的方法用于抗體的質量控制以及抗體和抗體產品的性質分析。ITC可以快速有效地測定多種參數，例如抗體親和力(Ka)、抗原 結合熱(ΔH)以及抗原抗體的結合比（n）。抗體結構上的改變(例如片段化、部分變性以及偶聯修飾)都會影響抗體的結合性能。另外，結合熱可以用來指示抗原抗體在體內和體外的相互作用。

圖1 典型的ITC抗體實驗結果圖 上半部分表示每次注射采集的數據。下半部分表示每次注射的釋放的熱量（上圖中每個峰的面積積分）對滴定抗原與樣品池中抗體的摩爾比作圖

在ITC實驗中，一個配體（如受體、抗體）分子 在恒溫條件下滴定到另一個相互作用分子的溶液中，結合釋放的熱（ΔH）被實時記錄下來。連續進行多次滴定，分子結合釋放或吸收的熱直接正比于結合的分子數量。當系統達到飽和的時候，只能觀察到稀釋熱。將每次滴定產生的熱效應與滴定和被滴定分子的摩爾比作圖，可以得到一條結合曲線（圖1）。MicroCal ITC能自動完成滴定、數據采集和分析，使整個實驗過程非常簡單。ITC進行一次滴定通常不到一小時即可完成。在這份應用指南中， ITC被用于奎納定抗體和茶堿抗體與各自抗原結合的活力和親和力測定。也被用于證明共價耦聯奎納定抗體對其活性有不利的影響。這種方法的準確性和重復性通過茶堿抗體與抗原的結合試驗得到證實。

確定活性抗體的濃度 茶堿是一種低分子量的支氣管擴張劑，被用于治療哮喘（圖2）。它的其它醫學用途包括作為利尿劑和強心劑。抗體通常用于診斷試劑盒中。制備出好的試劑盒，知道所用抗體的活性非常關鍵。我們證實ITC可以在較寬的濃度范圍內確定溶液中活性抗體的濃度。利用ITC測定了茶堿與五種不同濃度抗體IgG的結合。如圖3，活性分子的濃度對根據280nm吸光值得到的總蛋白濃度作圖。

圖3 兩種方法測得抗體濃度比較 實驗在30℃進行，樣品池的體積是1.3ml。抗茶堿IgG抗體配成五種不同濃度，從0.8mg/ml到1.2mg/ml，蛋白濃度通過OD280吸收確定。所有滴定實驗過程中，注射器中茶堿的濃度均為160μM。每次滴定實驗共滴18次，每次滴10μl，每兩次滴定間隔3.5min。將ITC測得的抗體活性濃度對總蛋白濃度作圖，并進行線性擬合。