去污劑對紅血球細胞膜穩定性的影響
相關專題 ? 目的和要求 1.了解各種去污劑對紅血球細胞膜 穩定性的影響 2 .學會制備紅血球細胞 原理 多種去污劑可以溶解細胞膜上的磷脂化合物,從而使細胞膜破裂,釋放出細胞內物質。 血紅蛋白在540nm有特異吸收峰。去污劑作用后的無細胞膜溶液于540nm處的A值大小可以表示其紅血球細胞對不同去污劑的敏感性。 步驟 1.紅血球等滲溶液的制備 取已加抗凝劑的豬血2.5mL,加生理鹽水10.0mL,離心20方針(2000rpm),收集沉下的紅血球,用生理鹽水洗滌一次(5mL),再離心20分鐘(2500rpm),收集沉淀,加10mL生理鹽水,懸浮紅血球,即為紅血球等滲溶液,備用。 2.取4支試管各加0.2mL紅血球等滲溶液,分別對應加入10.0g/L的Triton X-100,Brij58,CTAB,SDS 5mL,小心混勻,2500rpm離心20分鐘,收集上清液,測540nm的A值(以相同操作,不含紅血球的去污劑作參比)。 以Triton X-100的A值作為100%的溶解作用,計算其它去污劑的相對溶解作用。 3.不同濃度的中性去污劑對細胞膜的溶解作用 取6支試管,各加生理鹽水5mL,紅血球等滲液1.0mL,向各管對應加入10.0g/L、8.0g/L、6.0g/L、4.0g/L、2.0g/L、1.0g/L的Triton X-100 50Ul,小心混勻,置于37度恒溫水浴中20分鐘,2500rpm離心20分鐘,取上清液于540nm處測吸收值,計算相對溶解作用(參比液:5.0mL生理鹽水+50uL不同濃度的Triton X-100)。 以Triton X-100的不同濃度為X軸,相對溶解作用為Y軸,作圖。 4 .計算公式