相關專題 ? 醋酸纖維膜電泳是一項簡便而又迅速的方法。它的優點是：①電泳區帶分離清楚，比瓊脂 平板電泳分辨率高；②可以定量；③樣品用量少，只需要幾微升即可。 （一）材料與試劑 1．pH8.6離子強度0.05巴比妥緩沖液 2．0.5％氨基黑染色液 3．透明液： 冰醋酸 3 份 95％乙醇 2 份 混合即可 4．醋酸纖維膜 （二）操作方法 1．將醋酸纖維膜條浸于巴比妥緩沖液中，浸透后用竹鑷子夾到濾紙上，吸去過多的水分。將膜的光滑面向下搭在電泳槽 兩側的濾紙橋上，注意搭平。 2．加樣 用微量加樣器于負極端1.5cm處加樣1μl～3μl，注意樣品要成一條直線且垂直方向。也可用血球計數板蓋玻片蘸取樣品輕輕點上。 3．電泳 電壓10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm電泳45min～60min，至電泳區帶展開約2.5cm～3.5cm時，關閉電源。 4．染色 將膜浸于氨基黑染色液中，染色數分鐘。 5．透明 將染色的醋酸纖維膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色為止。為了防止膜上出現許多氣泡，可以逐漸升高透明液濃度10％、20％以至30％。 6．結果觀察及保存 透明后，將膜貼于玻璃上，干后取下，即可觀察結果并保存。 7．定量 將各區帶剪下，分別浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振搖數次，約2h，色澤被浸出，于580nm～620nm比色，測出各區帶的OD值。同時剪一塊大小相似無蛋白的透明膜同樣處理，做為對照。 計算各區帶蛋白含量百分比（以血清為例） 總OD值T＝A+α1+α2+β+γ 白蛋白％=A/T×100％ 以此類推。 （三）注意事項 1．醋酸纖維膜孔隙小，含水量少，且較薄，因此它對熱很敏感，故應注意控制電壓、電流。 2．樣品不可過多，只需幾微升即可。 3．加樣一定要呈直線、垂直、分布均勻，這樣泳動的區帶整齊、不歪。 4．注意醋酸纖維膜的質量，浸泡很久仍有大塊白色硬點者可棄之不用。