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實驗原理

維生素B2（核黃素）在440~500nm波長光照射下發生黃綠色熒光。在稀溶液中其熒光強度與維生素B2的濃度成正比。利用硅鎂吸附劑對維生素B2的吸附作用去除樣品中的干擾熒光測定的雜質，然后洗脫維生素B2, 測定其熒光強度。試液再加入連二亞硫酸鈉（Na2S2O4），將維生素B2還原為無熒光的物質，再測定試液中殘余熒光雜質的熒光強度，兩者之差即為食品中維生素B2所產生的熒光強度。

試劑和器材

一、試劑

0.1 mol/L鹽酸; 1 mol/L氫氧化鈉; 0.1 mol/L氫氧化鈉; 20%(w/v)連二亞硫酸鈉溶液; 洗脫液：丙酮+冰醋酸+水（5+2+9）; 0.04%溴甲酚綠指示劑; 3%（v/v）高錳酸鉀溶液; 3%(v/v)過氧化氫溶液；2.5mol/L無水乙酸鈉溶液；硅鎂吸附劑：60~100目，sigma 公司產品。

10%木瓜蛋白酶：用2.5mol/L乙酸鈉溶液配制。使用時現配制。

10%淀粉酶：用2.5mol/L乙酸鈉溶液配制。使用時現配制。

維生素B2標準液的配制：

A) 維生素B2標準儲備液（25μg/mL）：將標準品維生素B2粉狀結晶置于真空干燥器中。經過24小時后，準確稱取50mg，置于2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5mL水。將容量瓶置于溫水中搖動，待其溶解，冷卻至室溫，稀釋至2L，移至棕色瓶中，加少許甲苯復蓋于溶液表面，于冰箱中保存。

B) 維生素B2標準使用液：吸取2.00mL維生素B2標準儲備液，置于50ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度。避光，貯于4℃冰箱，可保存一周。此溶液每毫升相當于1.00μg維生素B2。

二、材料

新鮮豬肝或干黃豆。

三、器材

試管1.5×20cm（×4）; 移液管10mL（×1）, 1 mL（×2）；容量瓶100mL（×1），10mL（×1）；高壓消毒鍋，電熱恒溫培養箱，維生素B2吸附，熒光分光光度計 。

操作方法

一、樣品提取

1．水解：稱取2~10g樣品（約含10~200μg 維生素B2）于100ml三角瓶中，加50mL 0.1mol/L鹽酸，攪拌直到顆粒物分散均勻。用40ml瓷坩堝為蓋扣住瓶口，于121℃高壓水解樣品30min。水解液冷卻后，滴加1mol/L氫氧化鈉，用0.04%溴甲酚綠作外指示劑調至pH為4.5。

2．酶解：含有淀粉的水解液：加入3ml 10%淀粉酶溶液，于37~40℃保溫約16h。含高蛋白的水解液：加3ml10%木瓜蛋白酶溶液，于37~40℃約16h。

3．過濾：上述酶解液定容至100ml，過濾。此提取液在4℃冰箱中可保存一周。