相關專題 ?

【目的】 　　1.掌握電泳法分離蛋白質的原理、操作方法。 2.了解電泳法分離蛋白質的臨床意義。 【原理】 帶電粒子在電場中向與其電性相反的電極泳動的現象稱為電泳。血清中各種蛋白質的等電點大多在pH4.0～7.3之間，在pH8.6的緩沖液中均帶負電荷，在電場中都向正極移動。由于血清中各種蛋白質的等電點不同，因此在同一pH環境中所帶負電荷多少不同，又由于其分子 大小不同，所以在電場中泳動速度也不同。分子小而帶電荷多者，泳動速度較快；反之，則泳動速度較慢。因此通過電泳可將血清蛋白質分為5條區帶，從正極端依次分為清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等，經染色可計算出各蛋白質含量的百分數。 醋酸纖維素薄膜電泳具有微量、快速、簡便 、分辨率高等優點，廣泛應用于血清蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、脂蛋白、結合球蛋白、同工酶的分離和測定。 【器材】 　 醋酸纖維素薄膜（2cm×8cm）、培養皿、濾紙、無齒鑷、剪子、加樣器（可用蓋玻片或X膠片或微量加樣器）、直尺、鉛筆、玻璃板（8cm×12cm）、試管、試管架、吸管、電泳儀 、電泳槽、分光光度計或吸光度掃描計。 【試劑】 　 1. 巴比妥緩沖液(pH8.6，0.07mol/L，離子強度0.06) 稱取巴比妥鈉12.76g、巴比妥1.66g，加500毫升蒸餾水，加熱溶解。待冷至室溫后，再加蒸餾水至1000毫升。 2. 氨基黑10B染色液 稱取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混勻，加蒸餾水至100ml。 3. 漂洗液 甲醇45ml、冰醋酸5ml，混勻后加蒸餾水至100ml。 4. 洗脫液 0.4mol／LNaOH溶液。 5. 透明液 稱取檸檬酸21g，N-甲基-2-吡咯烷酮150g，以蒸餾水溶解并稀釋至500ml。 　 【操作】 1. 準備 將緩沖液加入電泳槽 的兩槽內，并使兩側的液面等高。裁剪尺寸合適的濾紙條，疊成四層貼在電泳槽的兩側支架上，一端與支架前沿對齊，另一端侵入電泳槽的緩沖液內，使濾紙全部濕潤，此即 “濾紙橋”（圖3-1）。

將醋酸纖維素薄膜切成2cm×8cm大小，在無光澤面的一端約1.5cm處，用鉛筆輕劃一直線，作為點樣位置。然后將無光澤面向下，置于盛有巴比妥緩沖液的培養皿中浸泡，待充分浸透（約20分鐘）即無白色斑點后取出，用潔凈濾紙輕輕吸去表面的多余緩沖液。 2. 點樣 取少量血清于玻璃板上，用加樣器取少量血清(約2～3μl)，加在點樣線上，待血清滲入膜內，移開加樣器。點樣時應注意血清要適量，應形成均勻的直線，并避免弄破薄膜（圖3-2）。