表達純化后的蛋白產物，特別是蛋白品的分析過程中，需要對蛋白的末端進行驗證，以保證表達純化產物的N端和C端序列準確。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一，有著廣泛的應用。百泰派克公司采用島津公司 edman測序系統，為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產物、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務。采用我們的測序系統，可以測定N端30個氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統，可以測定N端的60-70個氨基酸。百泰派克公司也建立了以先進的LC-MS/MS技術進行N-端測序的平臺，可以測出封閉和修飾的蛋白質末端，與Edman降解法形成互補，保證N端測序服務的順利進行。

在蛋白質測序前，蛋白樣品首先經過SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉移到PVDF膜上；經過染色確定把蛋白條帶并切出；使用Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。Edman降解測序是通過循環反應從蛋白質的N端開始逐個鑒定氨基酸的種類，從而對蛋白質的N端序列進行測定。每一個Edman測序反應包括3步：第一步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結合的殘基轉化成為更為穩定的PTH殘基，經過在線的HPLC分析，根據洗脫時間確定氨基酸種類。

Edman測序反應過程

基于Edman降解的蛋白質N端測序服務流程

Edman測序實驗流程圖

應用領域

? 蛋白表達產物的驗證：重組蛋白插入位點和表達順序是否正確
? 細胞株建立和發酵過程中蛋白產物的驗證：驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物N端甲硫氨酸和信號肽是否正確處理；
? 蛋白降解/酶切分析：對降解/酶切形成的新蛋白片段N端進行分析，確定斷裂/酶切位點；
? De-novo測序：對于蛋白數據庫中不存在的全新蛋白序列進行分析。

關于樣品

PVDF膜類樣品的準備過程

1.樣品電泳和電轉
a. 對蛋白樣品進行1D或者2D跑膠
b. 將蛋白膠上的樣品轉移至PVDF膜上；注意：千萬不要使用硝酸纖維素膜（Nitrocellulose membranes）
c. 在此過程中請佩戴手套和頭套，避免自身角蛋白對測序結果的影響

2.PVDF膜的染色
a. 染色過程中可以使用考馬斯亮藍或者立春紅對PVDF膜進行染色；注意：千萬不要使用銀染的方法進行染色
b. 染色完成之后，可以使用雙蒸水對PVDF膜進行清洗
c. 如果轉膜的緩沖液中含有甘氨酸，需要對PVDF膜進行多次沖洗，以避免甘氨酸對后續分析的影響
d. 更詳細的樣品準備步驟，見Edman測序樣品準備Protocol

3.靶蛋白條帶獲取
a. PVDF膜染色后，靶條帶清晰可見，用潔凈的解剖刀將靶蛋白條帶切下
b. 在蛋白量允許的情況下，可以準備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量

4.樣品運輸
對切下的蛋白條帶進行密閉包裝，使用冰袋運輸即可

溶液樣品的準備過程

1.蛋白的純度和用量
a. 樣品需要量在1-10ug
b. 樣品純度要＞90%
c. Buffer中不要使用表面活性劑，并盡可能降低溶液的鹽濃度
d. Tris, glycine, guanidine, glycerol, sucrose, ethanolamine, SDS, Triton, X-100, Tween和其他的去垢劑, ammonium sulfate 和其他的銨鹽均會對后續的氨基酸鑒定產生影響，在樣品準備過程中要避免使用
e. 樣品準備過程全程佩戴口罩和頭套，避免角蛋白的影響

2.蛋白樣品的運輸
a. 液體樣品推薦干冰運輸
b. 液體樣品也可以在冷凍抽干或者真空抽干后，使用冰袋運輸

研究案例

如下圖所示，通過Edman測序，可提供鑒定的氨基酸的詳細信息。

Edman測序研究案例

中/英文項目報告

在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：
1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜參數（中英文）
3. 蛋白質N端測序的詳細信息
4. 質譜圖片
5. 原始數據

一站式服務

您只需下單-寄送樣品
百泰派克一站式服務完成：樣品處理-上機分析-數據分析-項目報告

基于Edman降解的蛋白質N端測序由北京百泰派克生物科技有限公司 為您提供，如您想了解更多關于基于Edman降解的蛋白質N端測序報價、參數等信息 ，歡迎來電或留言咨詢。

注：該產品未在中華人民共和國食品藥品監督管理部門申請醫療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關用途。