用親水相互作用色譜/串聯質譜法定量測定皮下組織微透析液中的乙酰膽堿

Fu B, Gao X, Zhang SP, Cai Z, Shen J. Rapid Commun Mass Spectrom. 2008 May; 22(10): 1497-502.

摘要：最近有報導乙酰膽堿在組織炎癥調節方面發揮重要作用。為了進一步探討這一新發現的類膽堿能抗炎途徑，需要追蹤組織中乙酰膽堿的濃度變化。本文報導了一種親水相互作用色譜與電噴霧電離串聯質譜(HILIC/ESI-MS/MS) 聯用方法，用于分離和定量測定正常與局部炎癥大鼠微透析液樣品中的乙酰膽堿。采用兩性固定相色譜柱等度洗脫實現了乙酰膽堿與干擾性內源性化合物和無機陽離子的分離。用正離子模式的低能量碰撞誘導解離串聯質譜(CID-MS/MS) 分析，采用以下質量躍遷進行多反應監測(MRM)：乙酰膽堿m/z 146 —> 87，內標乙酰膽堿D-9 m/z 155 —> 87。乙酰膽堿的柱上檢測限為0.075 fmol (信噪比3:1)。柱上最低定量限為0.25 fmol。繪制了乙酰膽堿在空白微透析液中的校正曲線，線性范圍為0.025-50 nM 和0.025-0.5 nM，相關系數分別等于或大于0.9994 和0.9969。高濃度(2 nM) 和低濃度(0.5 nM) 乙酰膽堿的回收率分別為90-96% 和95-109%。日內和日漸重現性的變異系數分別等于或小于7.3% 和10.4%。已將本方法成功地用于正常和炎癥大鼠組織微透析液中乙酰膽堿的測定。