用反相液相色譜-質譜和體外13C 標記同時定量測定中心碳代謝和能量代謝相關的代謝物

Yang WC, Sedlak M, Regnier FE, Mosier N, Ho N, Adamec J. Anal Chem. 2008 Nov 14. [Epub ahead of print]

摘要：細胞內代謝物的全面分析是闡釋細胞內生物過程的重要手段。雖然反相液相色譜-質譜法(RPLC-MS) 的分辨率和靈活性已使其成為代謝物分析最強大的工具，但即使是最簡單的代謝組，其結構的多樣性仍對分析提出了巨大的挑戰。本文報導了一種實用的RPLC-MS 方法，用于鑒定和定量檢測各類代謝物，包括糖、磷酸化糖，以及羧酸到磷酸化羧酸、核苷酸和同功酶等。本法利用(13) C 標記的標簽進行體外衍生，從而實現內標定量，并能從單次色譜分析中分離出結構異構體化合物對(如葡萄糖-6-磷酸鹽和果糖-6-磷酸鹽)。各代謝物的校正曲線線性范圍在2 個數量級以上，相關系數R (2) > 0.9975。大多數化合物信噪比為3 時檢測限低于1.0 muM (20 pmol)。鑒定并定量測定了酵母裂解液中三種與糖酵解、戊糖磷酸鹽通路和三羧酸循環相關的常見代謝物，相對標準偏差小于10%。